পোল্ট্রিতে HA ও HI টেস্ট করার সম্পূর্ণ গাইড (সহজ শর্ট টেকনিকসহ)

পোল্ট্রি খামারে রানীক্ষেত (Newcastle Disease) এবং অন্যান্য হেমাগ্লুটিনেটিং ভাইরাসের বিরুদ্ধে টিকার কার্যকারিতা (Titer) যাচাই করার জন্য HA (Hemagglutination) ও HI (Hemagglutination Inhibition) টেস্ট অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। সঠিকভাবে এই টেস্ট করতে পারলে ভ্যাকসিনের ডোজ নির্ধারণ, টাইটার মূল্যায়ন এবং ভ্যাকসিন প্রোগ্রাম ঠিক করা সহজ হয়।

HA (Hemagglutination) টেস্ট কী?

HA টেস্টের মাধ্যমে টিকার (Antigen) ৪ HA ইউনিট (4HA) নির্ণয় করা হয়, যা পরে HI টেস্টে ব্যবহার করা হয়।

মনে রাখার শর্ট টেকনিক

PAR

P = PBS

A = Antigen

R = RBC

অর্থাৎ এই ক্রমেই দিতে হবে।

HA Test Procedure

ধাপ–১

১২টি ওয়েলে (Well) প্রতিটিতে

৫০ µl PBS দিন।

ধাপ–২

১২ নম্বর ওয়েলে

৫০ µl Vaccine (Antigen)

দিয়ে Two-fold dilution করতে করতে ১ নম্বর পর্যন্ত আনুন।

সবশেষে ১২ নম্বর ওয়েল থেকে ৫০ µl ফেলে দিন।

ধাপ–৩

সব ওয়েলে

৫০ µl ১% RBC

যোগ করুন।

ধাপ–৪

২০–২৪°C তাপমাত্রায়

৩০ মিনিট অপেক্ষা করুন।

এরপর কী দেখবেন?

Buttoning

যেখানে RBC নিচে বসে লাল গোলাকার বাটনের মত দেখা যায় সেটাই Buttoning।

4HA বের করার নিয়ম

Buttoning যেখানে হবে,

তার ৩ ওয়েল আগে হবে 4HA

উদাহরণ

Buttoning = 10

তাহলে

4HA = 7

হিসাব

Dilution হবে

2

4

8

16

32

64

128

256

512

1024

ইত্যাদি।

যদি 4HA = 7

তাহলে Dilution =128

Vaccine Calculation

Formula

৪৪০০ ÷ Dilution = Vaccine (ml)

উদাহরণ

১% RBC তৈরির নিয়ম

যা লাগবে

• EDTA Tube
• PBS
• Centrifuge
• Test Tube
• Micropipette

Step 1

মুরগি থেকে

১–২ ml রক্ত সংগ্রহ করুন

(EDTA Tube-এ)

Step 2

এর সাথে

৮–১০ ml PBS

মিশিয়ে

২৫০০–৩০০০ rpm

৩ মিনিট Centrifuge করুন।

Step 3

উপরের স্বচ্ছ তরল ফেলে দিন।

নিচের RBC রেখে দিন।

Step 4

আবার PBS দিয়ে একইভাবে

মোট ৩ বার Wash করুন।

Step 5

Wash শেষে

৫০ µl Packed RBC

৫ ml PBS

=

১% RBC

নোট

প্রতিদিন Fresh RBC তৈরি করা উত্তম।

১ দিনের বেশি রাখা উচিত নয়।

HI (Hemagglutination Inhibition) Test

HI Test দিয়ে

মুরগির Antibody Titer নির্ণয় করা হয়।

মনে রাখার শর্ট টেকনিক

PSAR

P = PBS

S = Serum

A = Antigen

R = RBC

HI Test Procedure

Step 1

১২টি Well-এ

৫০ µl PBS

দিন।

Step 2

১ নম্বর Well-এ

৫০ µl Serum

দিয়ে

১১ নম্বর পর্যন্ত Two-fold dilution করুন।

১১ নম্বর থেকে ৫০ µl ফেলে দিন।

Step 3

সব ওয়েলে

৫০ µl 4HA Antigen

দিন।

৩০–৪৫ মিনিট অপেক্ষা করুন।

Step 4

সব ওয়েলে

৫০ µl ১% RBC

দিন।

আবার

৩০ মিনিট অপেক্ষা করুন।

Step 5

Plate-কে

৩০–৪৫°

কাত করে

Tearing

দেখুন।

Tearing কী?

RBC যদি নিচের দিকে গড়িয়ে যায়

তাহলে তাকে

Tearing

বলা হয়।

Control Well

১২ নম্বর Well

Control থাকবে।

এখানে RBC অবশ্যই Tearing করবে।

PBS কেন ব্যবহার করা হয়?

✔ pH ঠিক রাখে

✔ RBC জীবিত রাখে

✔ Antigen স্থিতিশীল রাখে

Centrifuge কেন করা হয়?

✔ RBC আলাদা করতে

✔ Plasma অপসারণ করতে

✔ অপ্রয়োজনীয় উপাদান দূর করতে

PBS তৈরির নিয়ম

বাজারে PBS Tablet পাওয়া যায়।

১টি Tablet

১০০ ml Distilled Water-এ মিশিয়ে ব্যবহার করা যায়।

অথবা

০.৯% Saline দিয়েও অস্থায়ীভাবে প্রস্তুত করা যায় (ল্যাবের SOP অনুযায়ী)।

প্রয়োজনীয় যন্ত্রপাতি

• Micropipette (10–100 µl)
• Micropipette (100–1000 µl)
• Multichannel Pipette
• Yellow Tips
• White Tips
• Microplate (96 Well)
• Centrifuge
• EDTA Tube
• PBS
• RBC
• Vaccine (Antigen)

গুরুত্বপূর্ণ টিপস

✅ প্রতি ১০০০–২০০০ মুরগির জন্য সাধারণত ৮টি সিরাম স্যাম্পল নেওয়া হয়।

✅ প্রতি মুরগি থেকে ০.৫–১ ml রক্ত যথেষ্ট।

✅ সিরাম আলাদা করে ৭–১৪ দিন ফ্রিজে সংরক্ষণ করা যায়।

✅ দীর্ঘমেয়াদে Deep Freeze-এ রাখা যায়।

✅ ১% RBC প্রতিদিন নতুন করে তৈরি করাই উত্তম।

সতর্কতা: HA/HI টেস্টের ধাপ, RBC প্রস্তুতি, PBS-এর গঠন এবং ফলাফল ব্যাখ্যা করার ক্ষেত্রে বিভিন্ন ল্যাবের Standard Operating Procedure (SOP), ব্যবহৃত কিট ও রেফারেন্স অনুসারে কিছু পার্থক্য থাকতে পারে। তাই পরীক্ষা করার সময় সংশ্লিষ্ট ল্যাবের SOP অনুসরণ করা উচিত।

১. HA (Hemagglutination) টেস্ট কী?

HA (Hemagglutination) টেস্ট হলো এমন একটি ল্যাবরেটরি পরীক্ষা যার মাধ্যমে ভ্যাকসিন বা ভাইরাসের হেমাগ্লুটিনেটিং ক্ষমতা নির্ণয় করা হয় এবং 4HA ইউনিট বের করা হয়, যা HI টেস্টে ব্যবহৃত হয়।

২. HI (Hemagglutination Inhibition) টেস্ট কী?

HI টেস্টের মাধ্যমে মুরগির রক্তে Newcastle Disease (ND) বা অন্যান্য হেমাগ্লুটিনেটিং ভাইরাসের বিরুদ্ধে অ্যান্টিবডির (Titer) মাত্রা নির্ণয় করা হয়।

৩. HA ও HI টেস্টের মধ্যে পার্থক্য কী?

HA টেস্টে অ্যান্টিজেনের শক্তি (4HA) নির্ণয় করা হয়, আর HI টেস্টে মুরগির শরীরে তৈরি হওয়া অ্যান্টিবডির মাত্রা (Titer) নির্ণয় করা হয়।

৪. HA টেস্টে PAR বলতে কী বোঝায়?

PAR একটি সহজ শর্ট টেকনিক।

• P = PBS
• A = Antigen
• R = RBC
  এই ক্রমেই HA টেস্টে উপাদানগুলো যোগ করা হয়।

৫. HI টেস্টে PSAR বলতে কী বোঝায়?

PSAR হলো HI টেস্টের সহজ মনে রাখার সূত্র।

• P = PBS
• S = Serum
• A = Antigen
• R = RBC

৬. ১% RBC কীভাবে তৈরি করা হয়?

EDTA-যুক্ত রক্ত সংগ্রহ করে PBS দিয়ে ৩ বার ওয়াশ (Centrifuge) করার পর নির্দিষ্ট পরিমাণ Packed RBC-এর সাথে PBS মিশিয়ে ১% RBC প্রস্তুত করা হয়।

৭. ১% RBC কতদিন সংরক্ষণ করা যায়?

সর্বোত্তম ফলাফলের জন্য প্রতিদিন নতুন ১% RBC তৈরি করা উচিত। সাধারণত ২৪ ঘণ্টার বেশি সংরক্ষণ না করাই ভালো।

৮. PBS কেন ব্যবহার করা হয়?

PBS (Phosphate Buffered Saline) রক্তকণিকা (RBC) সুরক্ষিত রাখে, pH স্থিতিশীল রাখে এবং পরীক্ষার নির্ভুলতা বজায় রাখতে সাহায্য করে।

৯. HA টেস্টে 4HA কীভাবে নির্ণয় করা হয়?

যে ওয়েলে Buttoning দেখা যায়, তার তিন ওয়েল আগে 4HA ধরা হয়। এই 4HA ব্যবহার করেই HI টেস্ট করা হয়।

১০. প্রতি ১০০০ মুরগির জন্য কতটি রক্তের নমুনা নেওয়া উচিত?

সাধারণভাবে ১০০০–২০০০ মুরগির জন্য প্রতিনিধিত্বমূলকভাবে প্রায় ৮টি সিরাম স্যাম্পল সংগ্রহ করা হয়। তবে রোগের অবস্থা, ফ্লকের আকার ও ল্যাবের SOP অনুযায়ী নমুনার সংখ্যা পরিবর্তিত হতে পারে।

১১. HI টেস্টে ভালো টাইটার বলতে কী বোঝায়?

ভালো টাইটারের মান ভ্যাকসিনের ধরন, মুরগির বয়স, রোগের ঝুঁকি এবং ল্যাবের রেফারেন্স ভ্যালুর ওপর নির্ভর করে। তাই ফলাফল সবসময় ভেটেরিনারিয়ান বা ল্যাব বিশেষজ্ঞের ব্যাখ্যাসহ মূল্যায়ন করা উচিত।

১২. HA ও HI টেস্টের জন্য কোন যন্ত্রপাতি প্রয়োজন?

Micropipette, Multichannel Pipette, Microplate, Centrifuge, PBS, RBC, Antigen, Serum, EDTA Tube এবং Pipette Tips প্রয়োজন।

১৩. সিরাম কতদিন সংরক্ষণ করা যায়?

সিরাম আলাদা করার পর সাধারণত ৭–১৪ দিন রেফ্রিজারেটরে রাখা যায় এবং দীর্ঘমেয়াদে ডিপ ফ্রিজে সংরক্ষণ করা যায়।

১৪. HA ও HI টেস্ট কোন রোগের ক্ষেত্রে বেশি ব্যবহার করা হয়?

সবচেয়ে বেশি Newcastle Disease (ND/রানীক্ষেত) টাইটার পর্যবেক্ষণে ব্যবহার করা হয়। এছাড়াও হেমাগ্লুটিনেটিং বৈশিষ্ট্যসম্পন্ন অন্যান্য ভাইরাসের ক্ষেত্রেও এই টেস্ট ব্যবহার করা হয়।

১৫. HA ও HI টেস্ট করার সময় সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ বিষয় কী?

সঠিকভাবে 4HA নির্ণয়, Fresh ১% RBC ব্যবহার, নির্ধারিত সময় ও তাপমাত্রা অনুসরণ এবং ল্যাবের Standard Operating Procedure (SOP) মেনে কাজ করাই নির্ভুল ফলাফল পাওয়ার মূল শর্ত।